多方權威深入探討
揭示重組膠原蛋白成分檢測核心難題
5月30日，中國生(sheng)物(wu)工(gong)程(cheng)學會(hui)科創中國工(gong)作委員會(hui)聯(lian)合昌(chang)平合成生(sheng)物(wu)制(zhi)造轉化(hua)加速中心舉辦了“復雜基質中重組(zu)膠原(yuan)蛋(dan)白檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)方法”研討會(hui)。會(hui)中，生(sheng)物(wu)醫藥、分析檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)、材料(liao)科學等(deng)多領(ling)域專家聚焦復雜基質中重組(zu)膠原(yuan)蛋(dan)白的(de)分離與(yu)純化(hua)技(ji)(ji)術(shu)挑戰、高(gao)(gao)靈(ling)敏度及(ji)高(gao)(gao)特異性檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)方法的(de)開發與(yu)驗(yan)證(zheng)、標(biao)準化(hua)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)體系(xi)的(de)建(jian)立與(yu)行(xing)業監管需求等(deng)主題，解析技(ji)(ji)術(shu)難點(dian)，分享實(shi)踐經驗(yan)，并為檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)技(ji)(ji)術(shu)的(de)優化(hua)與(yu)相關標(biao)準的(de)制(zhi)定提(ti)供建(jian)議。
國家(jia)蛋白(bai)質科學中(zhong)心(xin)研究員賈辰(chen)熙表(biao)示，化妝(zhuang)(zhuang)品(pin)中(zhong)的重組膠(jiao)原蛋白(bai)檢測相較于敷料類醫療器(qi)械和生物(wu)樣本更(geng)為復雜(za)。化妝(zhuang)(zhuang)品(pin)中(zhong)添加(jia)了植物(wu)提取物(wu)、蛋白(bai)質、多(duo)糖、脂類、表(biao)面活性劑及色素等多(duo)種成分，會嚴(yan)重干擾膠(jiao)原蛋白(bai)信號(hao)，導致檢測時(shi)其信號(hao)較弱。同時(shi)，化妝(zhuang)(zhuang)品(pin)中(zhong)膠(jiao)原蛋白(bai)添加(jia)量(liang)通(tong)常較低(di)，對低(di)濃度(du)物(wu)質進行定量(liang)檢測難度(du)大。
成分檢測沒有“萬能鑰匙”
方法學驗證是關鍵
目前(qian)，針(zhen)對(dui)復(fu)雜基質中重(zhong)組膠原(yuan)蛋(dan)白的檢測方(fang)法(fa)(fa)尚未出臺國家統一(yi)的標準。中國科學院(yuan)過(guo)程工程研究所研究員張(zhang)貴鋒(feng)介(jie)紹，蛋(dan)白檢測方(fang)法(fa)(fa)主(zhu)要有凱氏定氮(dan)法(fa)(fa)、雙縮脲法(fa)(fa)、考馬斯亮(liang)藍法(fa)(fa)、福林酚法(fa)(fa)、BCA法(fa)(fa)及特征(zheng)多肽法(fa)(fa)等。
對(dui)于不(bu)(bu)同(tong)的檢(jian)測(ce)方(fang)法，與會(hui)嘉賓紛紛表示，不(bu)(bu)同(tong)的檢(jian)測(ce)方(fang)法各有(you)特點，均有(you)其適配的應用場景，無關新舊，關鍵是要根(gen)據不(bu)(bu)同(tong)基質，建(jian)立(li)(li)樣品前處理方(fang)法，有(you)效排(pai)除基質的干擾，選擇和建(jian)立(li)(li)針對(dui)復雜(za)基質的檢(jian)測(ce)方(fang)法，并通過方(fang)法學驗證其檢(jian)出限(xian)、定量限(xian)、線性、精(jing)密度、準(zhun)確性及檢(jian)測(ce)回收率。
清華大(da)學化學系(xi)教授、中國科(ke)學院院士李(li)景(jing)虹解釋(shi)說，復雜基質中重(zhong)組膠(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)(bai)的(de)(de)(de)分子檢測存(cun)在降(jiang)解過程(cheng)復雜等(deng)難(nan)點，不能選用單(dan)一(yi)的(de)(de)(de)檢測方(fang)法(fa)(fa)，需根據不同蛋白(bai)(bai)的(de)(de)(de)差異(yi)性選擇相應的(de)(de)(de)檢測方(fang)法(fa)(fa)，并對不同類(lei)型重(zhong)組膠(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)(bai)的(de)(de)(de)不同氨基酸序(xu)列、結構包(bao)括動態變化和(he)相互作用進行研(yan)究和(he)驗(yan)證。
中(zhong)(zhong)國(guo)食(shi)品(pin)(pin)藥品(pin)(pin)檢定研究院研究員徐麗明(ming)介紹(shao)，重(zhong)組膠原蛋(dan)(dan)白產品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)的(de)復雜基(ji)質(zhi)(zhi)是(shi)影響成分(fen)檢測(ce)的(de)重(zhong)要因素。現行(xing)的(de)標準化檢測(ce)方(fang)法(fa)(fa)主要針對純蛋(dan)(dan)白質(zhi)(zhi)樣(yang)品(pin)(pin)，測(ce)定方(fang)法(fa)(fa)在復雜基(ji)質(zhi)(zhi)中(zhong)(zhong)進(jin)行(xing)套用(yong)時(shi)，需(xu)考(kao)慮基(ji)質(zhi)(zhi)影響，做好樣(yang)品(pin)(pin)前處理(li)方(fang)法(fa)(fa)研究和驗證。“當復雜基(ji)質(zhi)(zhi)導致重(zhong)組膠原蛋(dan)(dan)白成分(fen)提取困難時(shi)，需(xu)要研究基(ji)質(zhi)(zhi)存在情況(kuang)下(xia)的(de)前處理(li)方(fang)法(fa)(fa)，并確保定量用(yong)標品(pin)(pin)和供(gong)試(shi)品(pin)(pin)是(shi)相同的(de)檢測(ce)條件（基(ji)質(zhi)(zhi)環(huan)境），如基(ji)質(zhi)(zhi)加標的(de)方(fang)式，且(qie)需(xu)通過多種方(fang)法(fa)(fa)進(jin)行(xing)相互驗證。”
北京師范大學(xue)化學(xue)學(xue)院教授(shou)閆東鵬指出，為了排(pai)除干擾(rao)，提高(gao)檢(jian)測的準確性(xing)，需要提供重(zhong)組膠(jiao)原蛋白產品前(qian)處理的方法(fa)(fa)，根據不同應用(yong)場景、不同研究體系(xi)，采用(yong)不同方法(fa)(fa)進行優勢互(hu)補。
針對復雜基(ji)質中(zhong)重組膠(jiao)原蛋白(bai)(bai)的(de)檢測方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)，徐麗明建議，可以(yi)采用(yong)多(duo)種方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)進行(xing)(xing)考(kao)(kao)察，比(bi)如(ru)雙縮(suo)脲法(fa)(fa)和氨(an)(an)基(ji)酸法(fa)(fa)等，但(dan)是(shi)也需(xu)進行(xing)(xing)充分驗證(zheng)。“雙縮(suo)脲法(fa)(fa)是(shi)在(zai)行(xing)(xing)業標準里列出的(de)一個方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)，但(dan)是(shi)在(zai)復雜基(ji)質里使(shi)用(yong)要(yao)(yao)進行(xing)(xing)充分的(de)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)學驗證(zheng)。氨(an)(an)基(ji)酸法(fa)(fa)是(shi)把(ba)重組膠(jiao)原蛋白(bai)(bai)水解(jie)成氨(an)(an)基(ji)酸，存在(zai)氨(an)(an)基(ji)酸水解(jie)效(xiao)率的(de)問(wen)題，還有檢測器靈敏(min)度的(de)問(wen)題，同樣需(xu)要(yao)(yao)進行(xing)(xing)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)學驗證(zheng)，另(ling)外還要(yao)(yao)考(kao)(kao)慮如(ru)何去除復雜基(ji)質的(de)干擾問(wen)題。”
她強調，只(zhi)有建立了(le)方(fang)法(fa)學(xue)驗證后的技術(shu)標準才(cai)能(neng)確保檢測結果(guo)的可信性。
成分檢測亟需標準
共促行業有序發展
值得關(guan)注的是，對重(zhong)組(zu)膠原蛋(dan)白進行準確檢(jian)測是一個高(gao)度復(fu)雜的過程，特(te)別(bie)是在護(hu)膚品成分(fen)這類“復(fu)雜基質”中(zhong)，未經完(wan)整鏈路的檢(jian)測驗證，其數據往(wang)往(wang)缺(que)乏參(can)考價值。 正因如此(ci)，行業亟需凝聚多方力量，共同(tong)推動科學、統一的國家標準的建立與(yu)出臺，有效(xiao)規避因檢(jian)測標準缺(que)失(shi)而導致(zhi)的功效(xiao)成分(fen)含(han)量不明確等(deng)問題，保(bao)障(zhang)消費者權益，并最終(zhong)助(zhu)力重(zhong)組(zu)膠原蛋(dan)白產業健康、可持續發(fa)展。
*數據引(yin)自新華網(wang)報道(dao)研(yan)討會專家共識
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